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悄悄把培育细胞遗传学的检测技能告诉你哦
阅读次数:271  发布时间:2019/6/27 9:31:20

细胞培育是体外研讨细胞生物学性状、遗传学及分子生物学特性zui直接有效的手法。培育细胞遗传学的主要检测技能,包含性染色体的检测、染色体闪现、染色体显带及染色体基因定位等。对培育细胞的分子生物学检测主要包含细胞DNA检测、RNA检测及蛋白质的检测,而相关的生物学检测主要包含细胞酶学检测及细胞凋亡的检测。

组织培育细胞是研讨细胞遗传zui便利、zui有效的办法和对象;也是揭示培育细胞性状的重要方面。人二倍体细胞具有46条染色体数就是用细胞培育法所确认出来的。当前已发展出染色体分带、姊妹染色单体分解染色、染色体原位杂交等多种技能。近年染色体荧光基因标记法又取得迅速发展,使基因作为实体得以在染色体上闪现,从而填补了染色体和分子遗传学之间的空白。染色体的研讨已成为组织培育技能中重要组成部分。

一、性染色体检测

(一)原理

在间期细胞核中,女人x染色质和男性Y染色质均可用特殊染色法闪现出来。女人的两个x染色体中的一个,在间期时的染色质呈异固缩(heteropycnosis),呈深染的小体称Barr氏体(图9—1)。Barr氏体坐落问期细胞核内面,呈三角形或半月形小体,易为碳酸复荭等染料着色。正常女人Barr氏体阳性,男性为阴性。男性Y染色质坐落间期细胞核近中心部,易为盐酸阿的平着色,荧光显微镜下调查发较强荧光,呈点状小体,发光部分系Y姿色体异固缩的长臂。初代培育细胞和二倍体细胞株均可调查到性染色质,传代细胞系表现不规律。

(二)办法

1.碳酸复红(basic fuchsin)闪现x染色质法

(1)资料:盖玻片培育的细胞。

(2)染色液

储存液:称碱性复红3g,溶于1OOml 70%乙醇中,可长时间保存。

(3)染色过程

1)细胞:盖玻片培育细胞用37℃的BSS漂洗后,立即投入染色液内染色5~lOmin(亦可先固定再染色);如用涂片标本则应待涂片干后,迅速投入96%酒精固定10~15min后再染色。

2)分解:用96%酒精分解lmin,分解时要不断摇摆,把片子上多余的染料漂洗掉。

3)脱水:通过纯酒精lmin。

4)封片:二甲苯透明2~3min,树胶封固。

(4)成果:细胞质不着色,细胞核染成紫红色;阳性Barr氏体附于细胞核膜内面呈三角或半月形小体。


2.荧光染色显不Y染色质法


(1)资料:盖玻片培育的细胞。

(2)染色液

(3)染色过程:Y染色质闪现染色与染色体荧光显带法相同。

上海恒远悄悄把培育细胞遗传学的检测技能告诉你哦。

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